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    病原检测在猪场疫病防控中的作用

    发布时间:2018-02-24 10:33:19

           

        猪病是制约养猪生产的重要因素之一,近年来随着养殖规模的不断扩大及国外引种数量的增长,我们发现养殖硬件设施和养猪人的水平在不断提高,但是疫情越来越复杂,防控越来越难。目前猪场病原多交叉、混合感染,表现出综合症候群的症状,临床表现以全身性感染疾病、呼吸道感染疾病和消化道感染疾病居多。毒株的变异增加了疫病的复杂性和防控难度,比如猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)最大的特征就是基因变异快速而复杂,而各个毒株的感染性与致病力差异较大;病原的隐性感染和亚临床感染导致猪群处于亚健康状态,种猪的隐性带毒导致了病原的广泛传播;已经控制的疫病再次出现疫情,近两年,全国一些大型猪场再次爆发猪丹毒等疫病。广大从业者逐渐意识到仅靠生产数据、临症、病变进行判断是较为困惑的,而且疫情一旦发生,治疗时间越长,猪场损失越大;因此当猪群出现疫情时,正确的诊断是采取进一步措施的必要前提。此时除了生产数据、临症、病理剖解等“外部信号”,我们还需要借助实验室检测结果的“内部信号”来共同确认,实验室监测已经成为生物安全体系不可或缺的重要环节。

    实验室检测包括疫病诊断分析(病原检测)和血清学检测(抗体检测)。病原检测是指通过实验室手段,如PCR或RT-PCR、细菌鉴定等方式找到使猪群患病的“凶手”;病原检测用于种猪引进、生物安全监控、猪场疫病病原监控,可以适时掌握猪场有无特定病原感染,尤其是临床感染出现以前的发现,对维持猪场健康和降低发病风险具有重要意义;在发病时,快速而准确的分子诊断技术能够为猪场的快速病原鉴定与解决方案提供重要依据??固寮觳馐侵父菘乖固逄匾煨苑从慈范ㄊ呛沃植≡目固?,主要用于评估猪群免疫水平,评价猪群免疫状况。作为辅助工具,实验室检测能够提供科学、规范、直观的检测报告和分析意见,切实为猪场的疫病防控提供参考。那么实验室检测应该怎么运用到猪场疫病防控中呢?病原检测与抗体检测又该怎样有效的结合呢?本文就猪场常规病毒性传染病病原进行实验室检测(流行病学调查、检测方向和目的、样品采集和处理、检测方法等)做一说明。

    1 流行病学调查

    在进行实验室检测之前我们需要做流行病学调查。调查包括猪群发病和死亡情况、临床症状、流行的特点和规律等,具体包括饲养规模、品种、代别、饲料情况、过去发生疫病情况、引种、周边疫情、临症及剖检病变、免疫等。前期调查作为实验室检测的一个基础性工作,对实验室检测的大方向奠定基础。

    2 检测目的

    根据不同目的制定相应的检测方案:

    引种检疫:病原检测与抗体检测结合,同时检测引种猪群带毒情况和抗体水平;100%检测,避免漏检;

    制定与修改免疫程序:病原检测与抗体检测结合,在了解猪场病原感染的基础上,掌握猪群免疫情况,从而选择免疫效果好的疫苗、恰当的免疫时机和病种;按照公猪100%、母猪5%、仔猪2%的比例进行检测;

    规范治疗:有效治疗的前提是准确的诊断,通过病原检测准确掌握猪群感染了哪些病原,再结合临床症状和病理剖检分析,可以做到规范治疗;建议根据发病群体的数量决定检测比例,大群体10个病猪以上,小群体5个病猪以上。

    3 样本的采集及处理


                16435W956-0.jpg

        采集样本的时机应恰当,由于多数弱毒疫苗不带有标记基因,病原检测无法区分疫苗毒和野毒,因此在采样时应避开疫苗排毒时间(详见表1);由于不同病原的靶器官不同,因此在检测不同病原时应选择不同的样本(详见表2)。

    表1 猪常规病原免疫后疫苗排毒时间

    三、采样时机

    采集样本的时机应恰当,由于多数弱毒疫苗不带有标记基因,病原检测无法区分疫苗毒和野毒,因此在采样时应避开疫苗排毒时间(见表2)。

     样本采集时应做好人身防护,采集的样本做好标记,如品种、日龄、时间、地点等。样本采集后若立即进行实验,则将样本放置于4℃下;若需要运输则经稳定化处理后冷冻尽快送至实验室。检测员在接到样本后应对样本进行前处理,血液样本可经过离心或静置析出血清,组织样本可加生理盐水研磨后离心取上清液。

    4 检测方法

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    样本处理后,可使用相应的病原检测试剂盒进行检测。目前常用的病原检测方法是基于分子生物学的核酸扩增法,根据核酸扩增中温度变化要求可分为两大类:一类是PCR扩增,一类是恒温扩增。PCR扩增需要通过几十个温度的循环变化来实现核酸扩增,这样的过程通常需要精密而复杂的仪器(PCR仪)来控制,扩增后的产物需要通过凝胶电泳配合凝胶成像系统才能得到检测结果,PCR法需要配置精密、昂贵的仪器和试剂,操作复杂、耗时长,且极易受污染,导致假阳的发生;而恒温扩增则是扩增反应的全过程在同一温度下进行,仅需一台恒温水浴锅就可完成。目前恒温扩增技术主要包括环介导等温扩增技术、滚环扩增技术、转录酶扩增技术、依赖核酸序列扩增技术等,这些技术均为国外公司拥有。交叉引物恒温扩增技术则是由四川纳比生物科技有限公司合作开发的一种新的核酸恒温扩增技术,也是中国首个具有自主知识产权的核酸扩增技术。四川纳比生物科技出品的交叉引物恒温扩增试剂盒是以交叉引物恒温扩增技术(CPA)为支撑,结合核酸试纸条快速检测技术建立CPA高新分子移动诊断平台,整个检测过程简单方便,无需复杂的仪器、专业的人员,检测结果更准确可靠。

    需要结合抗体检测时,也可以使用相应的商品化抗体检测试剂盒进行检测。


    5 小结

    @NGU19KK95[POT{]0Q}[GAM.png目前养猪业猪病复杂、一个猪场多种病原感染的问题普遍存在。但我们通过大量检测数据发现,即使某个猪场存在多种病原感染的情况下,并非任何时候任何病原都可以在任何病料样品中都检测出来。

    猪主要病毒性疾病表现以全身性感染、呼吸道感染、消化道感染居多。比如感染蓝耳病、伪狂犬等病原的猪只,在临床意义上的健康状态下猪只并不一定排毒,也就是说猪只在器官组织里存在病毒感染,而血清或唾液里是几乎检测不到病毒,这种情况在妊娠母猪上同样存在,阳性母猪在健康状态下通过胎盘将病原传递给胎儿的机会是较小的。而某个疾病出现临床表现前后在猪只的胎儿脐带血、分泌物、血清和唾液中可以检测到病毒。简言之,如果在猪只的胎儿脐带血、分泌物、血清和唾液中可以轻易检测到病毒,那就说明这个猪只出现了问题。因此在临床上我们通过这些特殊病料的检测来判断猪只是否处于发病或即将发病的状态,因此实验室的病原检测在猪场的疾病监控(发现有病毒血症的猪只)、疾病诊断等方面具有重要的意义。

    再如猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎等,这类疾病的感染潜伏期和排毒期相对较短,在健康猪群的粪便中几乎检测不到病毒,而在发病前后这段时间则可以在粪便中检测病原。因此在临床上检测到病毒,表明猪场存在发病的风险或者已经发病,对生产具有很大的指导意义。疾病虽然复杂,但依据不同病料的检测可以鉴别是什么病原导致的感染风险或发病,结合临床可以做到准确诊断。

    因此我们说把实验室检测作为“救火员”其实是一个错误的认知,哪怕找到了始作俑者,但你的损失已无法挽回,实验室检测在猪场防控中的重要意义在于其预警作用。结合猪场实际情况,特别是养殖规模、模式和环境等因素来制定科学合理的检测方案,定期做好病原学检测和血清学监测,合理调整免疫程序,同时加强营养,优化环境,以及有针对性的使用动保产品进行保健,是防控疫病的关键。



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